{"id":18238,"date":"2010-11-26T23:45:19","date_gmt":"2010-11-27T03:45:19","guid":{"rendered":"http:\/\/piel-l.org\/blog\/?p=18238"},"modified":"2010-11-28T19:50:41","modified_gmt":"2010-11-28T23:50:41","slug":"diagnostico-molecular-de-enfermedades-infecciosas-loop-mediated-isothermal-amplification-lamp-method","status":"publish","type":"post","link":"https:\/\/piel-l.org\/blog\/18238","title":{"rendered":"Diagn\u00f3stico Molecular de Enfermedades Infecciosas: Loop-Mediated Isothermal Amplification (LAMP) Method"},"content":{"rendered":"


<\/p>\n

\"\"<\/a><\/p>\n

El control de enfermedades infecciosas, como por ej. leishmaniasis (Leishmania <\/em>spp.), la enfermedad de Chagas (Trypanosoma cruzi<\/em>) y la tripanosomiasis africana (T. gambiense<\/em>), depende de un diagn\u00f3stico preciso y el tratamiento apropiado de los pacientes que la sufren. En muchos casos, la variabilidad gen\u00e9tica intr\u00ednseca del agente infeccioso obliga al establecimieto de pruebas diagn\u00f3sticas espec\u00edficas para distinguir tal variabilidad;<\/p>\n

<\/p>\n

es el caso de la diversidad de especies de Leishmania<\/em> circulantes en un \u00e1rea determinada [1]<\/sup><\/strong>, o la tripanosomiasis africana producida por T. gambiense<\/em> o T. rhodesiense <\/em>[2]<\/sup><\/strong>. Los m\u00e9todos de diagn\u00f3stico de rutina estan basadas en la visualizaci\u00f3n del organismo infeccioso, o en aspectos fenotipicos tales como la evaluaci\u00f3n de m\u00faltiples isoenzimas o reacciones inmunol\u00f3gicas entre otras.\u00a0 En muchos casos estos m\u00e9todos tienen sensibilidad limitada.<\/p>\n

La amplificaci\u00f3n de DNA o RNA mediante la t\u00e9cnica de la reacci\u00f3n en cadena de la DNA polimerasa (PCR, siglas en ingles) y sus variantes, adem\u00e1s de los distintos enfoques para la detecci\u00f3n de los productos que se generan, constituye una de las metodolog\u00edas m\u00e1s valiosas en el campo de la medicina cl\u00ednica. Se han desarrollado y aplicado una gran cantidad de ensayos de PCR con alta especificidad y sensibilidad en la identificaci\u00f3n de organismos pat\u00f3genos y el diagn\u00f3stico de enfermedades infecciosas (http:\/\/www.pcr-encyclopedia.com\/pcr-diagnostics-6262.html<\/a>). Los l\u00edmites de detecci\u00f3n de estos ensayos pueden alcanzar por ej. <10 copias de la secuencia blanco y en algunos casos, cuando se utliza DNA purificado, puede detectarse del orden de fentogramos (fg=10-15<\/sup> g), cantidad que en general es menor a la contenida en un organismo infeccioso (picogramos, pg=10-12<\/sup> g). Entre las principales limitaciones de esta metodolog\u00eda est\u00e1 el costo del instrumental (termociclador), lo elaborado de los m\u00e9todos de detecci\u00f3n y lo impr\u00e1ctico de su implementaci\u00f3n en condiciones de campo.<\/p>\n

Recientemente, se desarrollo una nueva variante de la t\u00e9cnica de PCR llamada Amplificaci\u00f3n Isot\u00e9rmica Mediada por Lazo (LAMP: Loop-Mediated Isothermal Amplification Method) [3]<\/sup><\/strong>. Esta metodolog\u00eda utiliza m\u00faltiples iniciadores (\u201cprimers<\/em>\u201d) y condiciones isot\u00e9rmicas (60-65 \u00b0C) para la amplificaci\u00f3n de la secuencia blanco, en un tiempo relativamente corto (30 min-1h), utilizando la Bst<\/em>-DNA polimerasa (Bst<\/em>-DNApol<\/em>). LAMP no requiere termociclador para garantizar los ciclos de denaturalizaci\u00f3n-reasociaci\u00f3n para la hibridaci\u00f3n de los primers y la actividad de la polimerasa, como ocurre en la PCR. Similar a una reacci\u00f3n de PCR anidada (\u201cnested <\/em>PCR\u201d), LAMP requiere de varios primers<\/em>, 4 a 6, que reconocen y se unen por homolog\u00eda a distintas regiones del blanco; estos primers <\/em>pueden generarse a trav\u00e9s del software Primer Explorer v3 (https:\/\/primerexplorer.jp\/lamp3.0.0\/index.html<\/a>). La s\u00edntesis de DNA es producto de la actividad de polimerizaci\u00f3n y desplazamiento de cadena de DNA (5\u00b4 \u00ae 3\u00b4) por parte de la polimerasa, debido al anclaje permanente de los primers<\/em> sobre los productos de amplificaci\u00f3n que se generan. La reacci\u00f3n genera en corto tiempo una cantidad extraordinaria del producto de amplificaci\u00f3n, el cual esta representado por una estructura de m\u00faltiples lazos con tallos sobre el DNA blanco, dando un aspecto parecido a las flores de un coliflor. El proceso es altamente espec\u00edfico y de una sensibilidad comparable al mejor ensayo de PCR. La observaci\u00f3n del producto de amplificaci\u00f3n puede hacerse visualmente por turbidez o por cambio de color asociado a reactivos propios de la reacci\u00f3n [4]<\/sup><\/strong>.<\/p>\n

Dada la simplicidad de LAMP, se han desarrollado distintos ensayos de alta especificidad, sensibilidad y facilidad de uso en condiciones de campo para el diagn\u00f3stico molecular de varios agentes infecciosos, tales como Plasmodium<\/em> spp.[5]<\/sup><\/strong> y Trypanosoma spp<\/em>.[6]<\/sup><\/strong>.<\/p>\n

Referencias<\/strong><\/p>\n

    \n
  1. L. I. C. Coelho<\/a> et al. (2010) Characterization of\u00a0Leishmania<\/em> spp. causing cutaneous leishmaniasis in Manaus, Amazonas, Brazil. <\/strong>PARASITOLOGY RESEARCH<\/a> DOI:\u00a010.1007\/s00436-010-2139-9 http:\/\/www.springerlink.com\/content\/r7175760417q6177\/<\/a><\/li>\n
  2. Z.K. Njiru et al. (2007). African trypanosomiasis: Sensitive and rapid detection of the sub-genus Trypanozoon by loop-mediated isothermal amplification (LAMP) of parasite DNA Int. J. Parasitol. doi:10.1016\/j.ijpara.2007.09.006 http:\/\/www.finddiagnostics.org\/export\/sites\/default\/programs\/hat\/docs\/Njiru_african_tryps.pdf<\/a><\/li>\n
  3. Notomi T. et al. (2000). Loop-mediated isothermal amplification of DNA. NAR 28 (12) e63. http:\/\/nar.oxfordjournals.org\/content\/28\/12\/e63.full.pdf+html<\/a><\/li>\n
  4. Wastling SL, et al. (2010). LAMP for Human African Trypanosomiasis: A Comparative Study of Detection Formats. PLoS Negl Trop Dis 4(11): e865. doi:10.1371\/journal.pntd.0000865 <\/li>\n<\/ol>\n

    http:\/\/www.plosntds.org\/article\/info:doi\/10.1371\/journal.pntd.0000865;jsessionid=DFA466F0851054A3520BCA83CDB5B1ED.ambra02<\/a><\/p>\n

    5.\u00a0\u00a0\u00a0\u00a0 Hiroshi Iseki et al. (2010).<\/strong> Evaluation of a Loop-Mediated Isothermal Amplification Method as a Tool for Diagnosis of Infection by the Zoonotic Simian Malaria Parasite\u00a0Plasmodium knowlesi<\/em>. J Clin Microbiol. 48:2509-2514.<\/p>\n

    http:\/\/jcm.asm.org\/cgi\/content\/abstract\/48\/7\/2509<\/a><\/p>\n

    6.\u00a0\u00a0\u00a0\u00a0 Njiru ZK, et al. (2008) Loop-Mediated Isothermal Amplification (LAMP) Method for Rapid Detection of\u00a0Trypanosoma brucei rhodesiense<\/em>. PLoS Negl Trop Dis 2(2): e147. doi:10.1371\/journal.pntd.0000147 http:\/\/www.plosntds.org\/article\/info:doi\/10.1371\/journal.pntd.0000147<\/a><\/p>\n","protected":false},"excerpt":{"rendered":"

    El control de enfermedades infecciosas, como por ej. leishmaniasis (Leishmania spp.), la enfermedad de Chagas (Trypanosoma cruzi) y la tripanosomiasis africana (T. gambiense), depende de un diagn\u00f3stico preciso y el tratamiento apropiado de los pacientes que la sufren. En muchos casos, la variabilidad gen\u00e9tica intr\u00ednseca del agente infeccioso obliga al establecimieto de pruebas diagn\u00f3sticas espec\u00edficas …<\/p>\n","protected":false},"author":57,"featured_media":0,"comment_status":"open","ping_status":"open","sticky":false,"template":"","format":"standard","meta":{"footnotes":""},"categories":[446],"tags":[],"class_list":["post-18238","post","type-post","status-publish","format-standard","","category-ventana-molecular"],"_links":{"self":[{"href":"https:\/\/piel-l.org\/blog\/wp-json\/wp\/v2\/posts\/18238","targetHints":{"allow":["GET"]}}],"collection":[{"href":"https:\/\/piel-l.org\/blog\/wp-json\/wp\/v2\/posts"}],"about":[{"href":"https:\/\/piel-l.org\/blog\/wp-json\/wp\/v2\/types\/post"}],"author":[{"embeddable":true,"href":"https:\/\/piel-l.org\/blog\/wp-json\/wp\/v2\/users\/57"}],"replies":[{"embeddable":true,"href":"https:\/\/piel-l.org\/blog\/wp-json\/wp\/v2\/comments?post=18238"}],"version-history":[{"count":0,"href":"https:\/\/piel-l.org\/blog\/wp-json\/wp\/v2\/posts\/18238\/revisions"}],"wp:attachment":[{"href":"https:\/\/piel-l.org\/blog\/wp-json\/wp\/v2\/media?parent=18238"}],"wp:term":[{"taxonomy":"category","embeddable":true,"href":"https:\/\/piel-l.org\/blog\/wp-json\/wp\/v2\/categories?post=18238"},{"taxonomy":"post_tag","embeddable":true,"href":"https:\/\/piel-l.org\/blog\/wp-json\/wp\/v2\/tags?post=18238"}],"curies":[{"name":"wp","href":"https:\/\/api.w.org\/{rel}","templated":true}]}}