CAPITULO 65: Efectividad de activos naturales y biotecnológicos en el tratamiento de estrias

SUMARIO

Las estrías causan disconformidad en la población joven. Nos propusimos comprobar efectividad de Formulación de Palmitoyl tripeptide 5, Dpantenol, Exto. de Marrubium vulgare al 3% con Aceite de rosa mosqueta al 5%, siguiendo los principios básicos de formulación, rotulandose Estrias “A”. Se tomaron 15 mujeres entre 1124 años con marcas de estrias. Se les indicó aplicarse Estrias “A”, durante 120 días, se midió antes y después del tratamiento, la hidratación y la elasticidad obteniéndose incremento de 30% y 70%, respectivamente. Se midió tambien la pigmentación obteniéndose disminución de 70 %. Estas mediciones se realizaron en Multidermascope 800. Observándose mejoria notable.

OBJETIVOS Y ANTECEDENTES

Teniendo presente la solicitud del consumidor y del especialista en obtener un producto cosmético seguro y efectivo; y en conocimiento de que cada vez mas, se están utilizando las materias primas de origen natural con el objeto de evitar las posibles reacciones adversas, nos propusimos comprobar la efectividad de una formulación compuesta por la combinación de Panthenol, El palmitoyl tripeptide5 y extracto de Marrubium vulgare al 3% y Aceite de Rosa Mosqueta Rosa aff. Rubiginosa L al 5 %, en una loción cremosa sin perfumes ni colorantes en el tratamiento de estrías. Las estrías en realidad son cicatrices que se forman cuando se desgarra la retícula elástica cutánea, es decir la membrana situada en la dermis, responsable de garantizar la elasticidad de la piel. Por lo tanto es el resultado del proceso de cicatrización de las retículas de fibra de elastina de la piel. Esta delicada membrana se daña con facilidad cuando la piel sufre algún trauma. Primero aparecen como líneas rojizas o púrpuras, pero tienden a decolorarse gradualmente a un color más pálido que el de la piel circundante. Resultan de estirar rápida y excesivamente la piel asociada al crecimiento rápido (común en la pubertad) o por cambios hormonales (carga por aumento de peso, menopausia o por el embarazo). Se hacen visibles rojizas y blancas como cicatrices en la piel. Al ganar o perder peso repentinamente, sin hacer ejercicios, se reduce el grosor de las fibras elásticas, inclusive la piel puede perder su color natural, por disminución de la melanina y esto se ve reflejado en las estrías. En el caso de la piel de las embarazadas, las estrías aparecen por un exceso de nutrientes y por la falta de hidratación adecuada, aunado al estiramiento de la piel. En relación a los cambios hormonales, el aumento de peso en la menopausia no escapa a la formación de las estrías lo cual explica que sean mas frecuentes en mujeres que en hombres. También son habituales en personas que hacen deporte, debido a que los brazos y las piernas ganan mucha masa muscular, pero cuando dejan de entrenar, esta se pierde y aparecen las estrías. Es importante, recordar que también existe la influencia hereditaria y el estado de la piel. Las zonas donde aparecen con mayor frecuencia las estrías son los pechos, el abdomen y los glúteos. El estiramiento de la piel induce a una reacción de la inflamación seguida por la degradación de la matriz de la piel a través de los metaloproteinasas de la matriz (MMPs) y al final de este proceso, aparecen las marcas del estiramiento. Las estrías pueden clasificarse en varios tipos:

  • Estrías de distensión, provocadas por pérdidas de peso repentinas
  • Estrías de pubertad, originadas por los cambios hormonales y corporales, aparecen en las nalgas, laterales del abdomen y brazos.
  • Estrías de embarazo, tipicas en las mujeres embarazadas a partir del 6to mes. Se localizan en el vientre, senos, caderas, nalgas y muslos.
  • Estrías atróficas, característica de los deportistas como consecuencia de movimientos forzados e intensos que causan el estiramiento y ruptura de las fibras elásticas.
  • Estrías de origen vatrógeno, aparecen después de un tratamiento con corticoides por la retención de líquido
  • Estrías de origen endocrino, relacionadas con enfermedades

como el sindrome de Cushing Beber agua para mantener la piel hidratada, aplicarse productos que hidraten y estimulen la producción de colágeno y elastina, y también la buena alimentación, son factores importantes para prevenir la aparición de las estrías. En cuanto al tratamiento, es importante señalar que se han reportado varios activos efectivos, entre los cuales se destacan: De origen natural:

  • Aceite de Rosa Mosqueta 5 al 10 %
  • Extracto de Plantago
  • Aceite de Pepitas de Uva
  • Extracto de Centella Asiática
  • Extracto de Equisetum arvense
  • Extracto de Equinacea Vitaminas y Alfahidroxiácidos
  • Ac. retinóico hasta el 1 %
  • AHA´S del 10 al 15 %

Uno de los activos reportados recientemente corresponde a la combinación de la casa PentapharmDSM. (pentapharm, 2007)1 desarrollado especialmente como una solución para interferir con el proceso de aparición de estrías: _ Panthenol ayuda a mantener la piel húmeda y flexible, estimula crecimiento de la célula y la reparación del tejido fino, e inhibe la inflamación y el enrojecimiento. _ El palmitoyl tripeptide5 estimula la producción de colágeno vía la activación TGFbeta, daños extracelular de la matriz de las reparaciones, y reestablece firmeza de la piel. _ El vulgare de Marrubium protege la piel contra la degradación y reduce la inflamación. Corresponde a un nuevo complejo que protege la estructura de la piel de las marcas de estiramientos, de ensanchar la piel (estrias) y activa el proceso de reparación estimulando la síntesis de colágeno y reduciendo la inflamación de la piel. Adicionalmente hidrata y suaviza la piel restaurando la apariencia corporal. A través de esta formulación se obtienen las siguientes ventajas:

Tratamiento preventivo y corrector contra las estrías Ayuda a reforzar la firmeza y elasticidad de la piel Hidrata y suaviza la piel Minimiza el aspecto de las estrías y restaura el aspecto

corporal La eficacia de este activo ha sido demostrada en estudios anteriores en la Protección in vivo de los modelos contra las Citocinas. La inflamación de las marcas de estiramiento y las enzimas de MMP son el instrumento en el daño infligido en las células de la piel por el cargamento mecánico. Se puede supervisar el funcionamiento de la combinación de los activos antes señalados por estudios con citocinas y la MMPs cuantificándolas simultáneamente en diversos tiempos. Se reporta igualmente pentapharm, 2007)1 el desarrolló de un modelo de ensayo para evaluar el efecto protector de varios compuestos: Fondo flexible de silicona que se estira sobre hemisferios unidos a un soporte acrílico (Ver figura N°1), simulación de la aparición de estrías en cultivos monocapa de fibroblastos, estiramiento equibiaxial posible hasta + 41 %. (Ver Figura N°2), medida del número y morfología de las células. (Ver Figura N°3), y cuantificación de interleucinas y MMP (cant. de proteínas, no actividad).

Figura N° 1: Modelo de monitoreo para el cultivo de células usadas para la simulación de la aparición de estrías (Pentapharm, 2007)1 .

Figura N° 2: Estudio con citocinas y la MMPs cuantificándolas simultáneamente en diversos tiempos (Pentapharm, 2007)1 .

a)
b)

Figura N° 3: (a) Fibroblastos estirados no protegidos, (b) Fibroblastos estirados con la combinación de activos al 0,05%.(Pentapharm, 2007)1

También se reporta que el aceite de Rosa Mosqueta de Rosa aff. Rubiginosa L, (Rosa Mosqueta) contienen el ácido transretinoico en forma natural. Este componente tiene una marcada acción antiinflamatoria mejorando la irrigación de las células. Su acción se centra en una aceleración de la epidermopoyésis y la capacidad de regeneración de los tejidos como consecuencia de una aceleración de la diferenciación de la queratina. Por otro lado el aumento del flujo sanguíneo y la modificación de la angiogénesis intensa se traducen en el mejoramiento de la irrigación. Sin olvidar que también por el contenido de ac. Transretinóico presenta actividad para las estrías por su acción exfoliadora (Sandoval, 2009)2. El aceite de Rosa Mosqueta es extraído de las semillas del fruto de la Rosa Mosqueta mediante procesos de alta tecnología, por prensado en frío, que protege la estabilidad de los principios activos y cumple con las normas internacionales de calidad y manufactura. La Rosa Mosqueta es un arbusto silvestre (Pareja, 1990)3 que crece en la zona centrosur de Chile y su clasificación botánica es: Nombre científico: Rosa aff rubiginosa L., Familia: Rosácea, Subfamilia: Rosoídea, Tipo: Rosa, y Otros nombres: Rosa Mosqueta, Rosa Canina La Rosa Mosqueta es el resultado de las investigaciones de Coesam® Group (Sandoval, 2009) 2 y (Cicconi, 2005) 4 conjuntamente con Fundación Chile en la selección genética del material vegetal correspondiente a la variedad bautizada como AP4 por su alto valor genético en relación a la productividad y composición química de los ácidos grasos poliinsaturados en el Aceite y vitamínicos de su cascarilla. El cultivo es realizado en forma orgánica con certificación otorgada por IMO Suiza, JAS/JONA Japón y USDA Estados Unidos. Se reporta que su composición es la siguiente: 100% puro y natural, rico en ácidos grasos esenciales poliinsaturados y ácido  y Figura N° 4: Composición reportada para el Aceite de Rosa Mosqueta (Sandoval, 2009) 2 (Cicconi, 2005) 4. En el análisis cromatográfico se reporta un alto contenido en ácidos grasos poliinsaturados esenciales: Linoleico: 44.5% y Linolénico:

35.0 %. Por su alto contenido (79.5%), en ácidos Linoleico, Linolénico y Transretinoico, es un óptimo regenerador de tejidos a nivel celular. Incrementa la capacidad de reestructuración de la epidermis y de producción de nuevos tejidos y mejora la irrigación de la piel. Reduce cicatrices, tonaliza y minimiza queloides, elimina cierto tipo de manchas superficiales, arrugas no profundas de la piel y disminución del tamaño y mejoramiento de las estrías3. Estas acciones se deben al contenido de Ácido Transretinoico (derivado del Retinol) que se encuentra presente en el Aceite de Rosa Mosqueta, otorgando los efectos benéficos de éste y careciendo de efectos secundarios indeseables, debido a que contiene ácidos grasos poliinsaturados y taninos con los que posiblemente forme complejos de liberación lenta. Por otra parte se reporta cada día el descontento de la población mundial en mayor porcentaje de la joven, en relación a su disconformidad en la aparición de las estrías por diferentes causas, constituyendo esta situación una necesidad estética y social de soluciones inmediatas

METODOLOGÍA

En base a estas premisas anteriores y siguiendo las normas de formulación de Productos Cosméticos (Castro 1.997)5, se diseñaron varias formulaciones, seleccionando una base hipoalergénica (sin colorante ni perfume) que correspondió a una loción cremosa W/O para incorporar los activos naturales, las cuales se sometieron a pruebas de estabilidad física a diferentes temperaturas y se comprobó su inocuidad microbiológica. La base seleccionada correspondió a la siguiente fórmula:

Tabla N° 1 : Composición de la base seleccionada.

LOCION CREMOSA O/W %
Gliceril estearato 5
Alcohol cetílico 2
Ceteareth12 2
Ceteareth20 2
Propilenglicol 8
Preservativos c.s.
Miristato de Isopropilo 15
Aceite Mineral 15
Agua C.S.P. 100

En este orden de ideas, se seleccionaron las siguientes mezclas de activos correspondientes a la combinación de: Panthenol, El palmitoyl tripeptide5 y extracto de Marrubium vulgare al 3%, y Aceite de Rosa Mosqueta Rosa aff. Rubiginosa L al 5 %. La muestra se rotuló como Crema Estrías “A”, que correspondía a la base de la loción cremosa más los activos seleccionados. Se realizó un estudio sobre 15 sujetos todos del sexo femenino con edades comprendidas entre 11 y 24 años que presentaban marcas de estrías blancas o rojas. Se les indicó aplicarse diariamente sobre la zona afectada la formulación rotulada como crema Estrías ¨A¨ durante 120 días. Se realizaron estudios de elasticidad, hidratación y pigmentación antes y después del tratamiento mediante el uso de un Multidermascope

Figura N° 5: Imagen del equipo Multidermascope 800® empleado en el estudio de las medidas de hidratación, elasticidad y pigmentación de la piel.

El Multidermascope 800® es un equipo de la casa Courage+Khazaka (2008)6, que mide la hidratación contenida en el estrato córneo, la cual es un parámetro crítico para la película hidrolipídica de la piel, así como también es capaz de realizar mediciones de la grasa de la piel, tanto del cabello como del cuero cabelludo, medida de la melanina (pigmentación de la piel) y recomendación del spf individual, y medida de la elasticidad de la piel. La hidratación juega un papel muy importante en nuestra vida diaria, por ejemplo la piel seca causada por los peligrosos efectos del sol, espacios con aire acondicionado, la polución, etc, es más propensa a la aparición de estrías. La medida de la hidratación de la piel está basada en el mundialmente conocido Método de Capacitancia, Método del Corneómetro®. Para lo cual se coloca la cabeza del electrodo verticalmente sobre la zona de la piel que desea medir. El electrodo comienza la medición cuando se encuentra en contacto con la piel. Una señal “beep” se escucha indicando que la medida se ha realizado exitosamente y se muestra el valor de la medida en la pantalla. Los siguientes valores son válidos para una piel sana y en condiciones ambientales normales (20 º C y con una humedad entre 40 – 60 %): Tabla N° 2: Valores de hidratación para una piel sana suministrados por el fabricante. Unidades arbitrarias entre 0 y 99

Frente, Zona T, Párpados, Mejillas, Cuero cabelludo, Comisura de los labios, espalda, cuello, parte alta del cuerpo Brazos, Manos, Piernas, Codos
Muy seca < 30 < 5
Seca 30 – 60 5 – 25
Suficientemente hidratada > 60 > 25

La medida de la melanina está basada en el Principio de Absorción. El electrodo emite luz de tres longitudes de ondas definidas. Un receptor mide la luz reflejada sobre la piel. Las posiciones del emisor y del receptor garantizan que solamente la luz difusa y esparcida se mida. Debido a que la cantidad de luz emitida esta definida, la cantidad de luz absorbida por la piel puede ser calculada. Solamente se requiere una simple presión del electrodo sobre la superficie de la piel para comenzar con la medición. El electrodo debe ser colocado vertical y rápidamente sobre la piel. La piel trabaja como un conductor de la radiación infrarroja. Como esta radiación ilumina la piel, los resultados de la medición son inducidos. Por tanto, es importante no realizar las mediciones bajo la luz directa del sol o lámparas. El electrodo es muy sensible y puede arrojar un mensaje de error tan pronto como reconoce mucha de esta radiación. Se recomienda medir en un cuarto lo más oscuro posible. Si no, proteger el entorno de la piel a medir con la mano o con el anillo de protección de luz, el cual se puede colocar alrededor del electrodo. Cuando se concluye la medición, el valor de la melanina se muestra en la pantalla. El valor de la melanina es individual para cada persona y depende principalmente de la raza. Para los 6 fototipos de piel conocidos, se ofrece la tabla de valores N° 3 (Escala General):

Tabla N°3: Valores de la melanina según los fototipos de piel.

Fototipo Descripción Promedio de contenido de Melanina
I Céltico: Piel clara y cabello rubio, ojos verdes, muchas pecas, cabello rojizo, sin bronceado, se quema rápidamente. 0 15
II Caucásico Blanco: Piel ligeramente oscura, pocas pecas, cabello de rubio a castaño, ojos azules, verdes o grises, ligeramente bronceado, se quema con dolor. 5 25
III Tipo Mezclado: Piel ligeramente morena, sin pecas, cabello marrón, ojos grises o marrones, buen bronceado, raramente se quema. 10 – 35
IV Tipo Mediterráneo: Piel oscura, sin pecas, cabello negro, ojos marrones, rápido bronceado, casi nunca se quema. 15 – 50
V Tipo Asiático / Indio 16 – 65
VI Piel Negra 60 99

La medida de la elasticidad está basada en el mundialmente conocido Método de Succión. La piel es dibujada por una presión negativa del electrodo sobre esta. Después de algunos segundos la presión se detiene y la piel se relaja de nuevo. La profundidad de penetración de la piel se determina ópticamente durante la succión y relajación. Para una medida exacta y precisa es importante que el electrodo se coloque en una superficie plana de la piel con una constante pero poca presión. Cuando el electrodo se coloca correctamente sobre la piel, la medición comienza automáticamente. En la pantalla aparece un contador de 6 segundos. La piel es succionada por 3 segundos con una presión negativa de 400 mbar. Dentro de este tiempo, se puede escuchar el sonido de succión.

Luego de este tiempo, el sonido y la presión negativa se detienen y la piel se relaja de nuevo en los próximos 3 segundos. Se debe mantener el electrodo durante el tiempo completo de la medición con una pequeña presión sobre la piel y esperar hasta que la medida sea mostrada en la pantalla.  El valor expresa la habilidad de la piel para resistir la presión, relajarse y regresar a su estado original después que la presión ha terminado. La elasticidad se

expresa en %.         Figura N° 6: Valores de elasticidad normal, medio y bajo según la edad, suministrados por el fabricante.

Igualmente se tomaron fotografías con una cámara digital cámara  Digital Casio Exilim S100 de 10,1 mega pixels (Ver Figura N°7),  antes y después del tratamiento.

Figura N° 7: Imagen de la cámara digital Casio Exilim S100 de 10,1 mega pixels.

Al final de estudio se consultó a las voluntarias con el objeto de conocer su opinión en cuanto al estado de su piel antes y después de la aplicación de la preparación. La encuesta que llenaron correspondió a la siguiente: Tabla N° 4: Encuesta aplicada a las voluntarias una vez concluido el

tratamiento.
VOLUNTARIAS SI NO
¿Se siente la piel sedosa?
¿La siente más elástica?
¿Disminuyó la visibilidad de
sus marcas?

Se aplicó a los datos la Prueba Q, para determinar la existencia de valores anómalos, así como también se encontró el límite de confianza para el valor promedio de los porcentajes obtenidos para cada determinación, a partir de la tabla de distribución “t” extraída de

Miller (1993)7

.   RESULTADOS Y DISCUSIÓN

En el presente trabajo se logró comprobar la efectividad de la combinación de los activos Panthenol, Palmitoyl tripeptido5 y Exto. De Marrubium vulgare con el Aceite de Rosa Mosqueta mediante un estudio realizado en 15 voluntarios del sexo femenino, con edades comprendidas entre 11 y 24 años que presentaban marcas de estrías rojas o blancas. Se les indicó aplicarse diariamente sobre la zona afectada la formulación rotulada como crema Estrías ¨A¨ durante 120 días, realizando medidas de la elasticidad, hidratación y pigmentación, antes y después del tratamiento mediante el uso de un Multidermascope 800®. Se pudo observar un aumento de 30,4% en la elasticidad, 72% en la hidratación de la piel, y un 71 % en la disminución del color, lo que deriva en una mejoría significativa en el aspecto de las estrías, así como en las características generales del tejido fino de la piel. La interpretación de los valores de hidratación “muy seca”, “seca” y “suficientemente hidratada” se escogieron de acuerdo a la experiencia del fabricante y corresponde solamente a una escala general. Los resultados se expresan en la siguiente tabla: Tabla N° 5: Medidas de hidratación de las voluntarias que participaron en el estudio antes y después del tratamiento con la crema de Estrías A, mediante el uso de un Microdermacope 800.

N° Voluntar io Antes tratamie nto Despué s tratamie nto Porcent aje de Increme nto (%)
1 20 34 70,0
2 18 31 72,2
3 17 29 70,6
4 20 35 75,0
5 17 29 70,6
6 19 33 73,7
7 15 26 73,3
8 21 36 71,4
9 18 31 72,2
10 20 34 70,0
11 19 33 73,7
12 16 27 68,8
13 21 36 71,4

Gráfico N°1: Resultados de la hidratación

Como se puede observar los valores muestran un aumento de la hidratación de la piel en un 72%, con un límite de confianza de 95% de 1,0, determinado de acuerdo a Miller(1993)7 . En cuanto a la elasticidad, la interpretación de los valores “baja”, “media” y “normal” se escogieron de acuerdo a la experiencia del fabricante y corresponde solamente a una escala general. Los resultados se expresan en la siguiente tabla: Tabla N° 6: Porcentaje de elasticidad de las voluntarias que participaron en el estudio antes y después del tratamiento con la crema de Estrías A, mediante el uso de un Microdermacope 800.

N° Voluntario Antes Tratamien to (%) Después tratamient o (%) Porcentaj e de Increment o (%)
1 72 93 29,2
2 75 96 28,0
3 60 78 30,0
4 65 85 30,8
5 72 93 29,2
6 68 90 32,4
7 70 91 30,0
8 69 90 30,4
9 61 79 29,5
10 63 82 30,2
11 75 97 29,3
12 67 88 31,3
13 68 90 32,4
14 75 98 30,7
15 64 85 32,8
1 2 3 4 5 6 7 8 0 20 40 60 80 100 % Elasticidad 9 10 11 12 13 14 15 Gráfico N° 2: Resultados de la elasticidad.
Nº de paciente Antes del tratamiento Después del tratamiento

Como se puede observar los valores muestran un aumento en la elasticidad de la piel en un 30%, con un límite de confianza de 95% de 0,7, determinado de acuerdo a Miller(1993)7 . La coloración de las marcas de estrías reveló los siguientes resultados, siguiendo la tabla N° 7. Tabla N° 7: Medidas de la pigmentación de las voluntarias que participaron en el estudio antes y después del tratamiento con la crema de Estrías A, mediante el uso de un Microdermacope 800.

N° Voluntari o Antes Tratamie nto (%) Después tratamie nto (%) Porcent aje de Increme nto (%)
1 44 26 18
2 42 25 17
3 38 22 16
4 45 26 19
5 44 25 19
6 53 31 22
7 47 28 19
8 50 29 21
9 36 21 15
10 34 20 14
11 38 23 15
12 48 28 20

Grafico N° 3: Resultados de la Pigmentación

Es notables en los resultados antes expuestos un aumento en la pigmentación de la piel en un 71%, con un límite de confianza de 95% de 1, determinado de acuerdo a Miller(1993)7 .

A continuación, se muestran imágenes de algunos casos tomados con la Cámara Digital Casio Exilim S100 de 10,1 mega pixels.

Figura Nº 8: Aspectos de las marcas de estiramiento antes y después del tratamiento con la crema de estrías ¨A¨. Voluntaria N°7. (a) Marcas de estrías antes del tratamiento, (b) Marca de estrías después del tratamiento (a los 120 días).

a) b)

Figura Nº 9: Aspectos de las marcas de estiramiento antes y después del tratamiento con la crema de estrías ¨A¨. Voluntaria N° 10. (a) Marca de estrías antes del tratamiento, (b) Marca de estrías después del tratamiento (a los 120 días).

a)
b)

Figura Nº 10: Aspectos de las marcas de estiramiento antes y después del tratamiento con la crema de estrías ¨A¨. Voluntaria N°

15. (a) Marca de estrías antes del tratamiento, (b) Marca de estrías después del tratamiento (a los 120 días).

Las voluntarias reportaron el siguiente resultado: Tabla N° 8: Porcentaje de la evaluación realizada por las voluntarias luego de aplicado el tratamiento con la formulación consistente en la combinación de activos y aceite de Rosa Mosqueta.

PACIENTE SI NO
¿Se siente la piel sedosa? 97%
¿La siente más elástica? 96%
¿Disminuyó la visibilidad de sus marcas? 70%

CONCLUSIONES De acuerdo a los resultados se concluye: La mezcla de los activos estudiados ha sido efectiva para el tratamiento de las marcas de estiramiento (estrías) y

cicatrices, ya que minimiza su visibilidad, aumenta la elasticidad y la hidratación de la misma. Por otra parte, esta mezcla puede ser usada en la población mundial joven ya que no se reportaron reacciones de sensibilidad y alergia, por el contrario los pacientes informaron sentir su piel más sedosa, elástica y con menos signos visibles de marcas, lo que mejora la calidad estética de la piel e induce a que se incorporen a la sociedad sin limitaciones.

REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS

1.Pentapharm. (2.007) “REGUSTRETCH”. http://www.pentapharm.com/

2.Sandoval M. Carmen. (2009) Departamento de investigación y desarrollo Laboratorios Coesam S.A.:http://coesam.cl/esp/investigacion.html

3.Pareja, Bertha. (1.990) “Contribución a La identificación y aplicaciones de los principios activos contenidos en el aceite de Rosa Aff. Rubiginosa L. (Rosa Mosqueta)”. Ciencia y Cosmética. Año 1, N°1, p. 16 y 17.

4.Cicconi, Cristina. (2.005) Conferencia magistral Guatemala.

5.Castro, A. de;(1.987) “Principios Básicos de Formulaciones Cosméticas”. Ed. A. de Castro, Caracas.

6.Courage+Khazaka electronic GmbH, (2.008) Información Tecnica. http://www.couragekhazaka.de/

7.Miller, J. C.; Miller, J. N. Estadística para Química Analítica. Segunda Edición. Adison Wesley Iberoamericana. 1993, EUA. p199.